应广大用户朋友的需求，我们将陆续推出《药品微生物检验问答集锦》系列，本文章为系列第三篇。本系列所列出的问题均是药品微生物检验过程中提问频次较高的问题，我们咨询专家老师后汇编，希望可以帮助药品微生物检验从业人员对检验过程中遇到的问题有新的理解。大家对感兴趣的、比较关注的问题，也可以留言，我们一起交流探讨！

1.硫乙醇酸盐流体培养基培养后如果有雾状或者絮状物质出现但不能确定是否是微生物生长，需要如何判断？

  参照《中国药典2015版1101无菌检查法》，如在加入供试品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，培养3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊，或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。

2.只用做无菌检查用的FTM和TSB的培养基适用性检查是否可以不用对照培养基？

  严格按照药典来说，可以选择不用。但是既然有对应的对照培养基，建议选择参比用于培养基的质量控制。

3.在琼脂培养基制备过程中，发现灭菌后的培养基制成的平板部分偏软甚至有不凝固的现象，是什么原因？

  主要是琼脂分布不均导致的。建议琼脂类培养基灭菌前加热溶解均匀（如果是大体积配制进行分装灭菌的培养基，建议煮沸溶解，搅拌分装）；灭菌后，使用前，关注培养基的透光性是否均一，如果不均一，轻轻摇晃使其均匀，再倾注平皿使用。

4.平板在培养箱中培养后，平板干裂，缩水是什么原因？如何避免？
  平皿干裂缩水，与琼脂的保水性、倾注培养基的量、平皿的透气性、培养箱条件等因素均有关系。
  a.琼脂：不同的琼脂在保水性方面略有差异，保水性差的琼脂可能会出现严重缩水或者干裂。
  b.培养基的量：倾注的培养基越少，平板越薄越容易干裂。按照GB4789要求，倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少为3 mm（直径90 mm的平皿，通常要加入18 mL～20 mL琼脂培养基）。如果平板需储存，或者培养时间超过48 h或培养温度高于40 ℃，则需要倾注更多的培养基。
  c.平皿的透气性：平板的密封性越好，保存和培养过程中培养基失水越少。虽然增加平板的密封性可以减少水份流失，但并非密封性越高越好，一些需氧型微生物（如铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌等），在密闭环境中生长较差，需要良好的透气性才能较好的生长。
  d. 培养条件：培养箱是影响平皿干裂问题的关键因素之一。大型的培养箱为了保证内部温度均一，通常带有较强的鼓风系统，内部有较强的空气流动。而气流越强，则越容易导致平皿失水。而对于一些没有鼓风系统的小型培养箱，则很少会出现平皿干裂现象。在培养箱内摆放平皿时，应尽量避开风口气流大的位置，同时远离培养箱内部发热板。
  综上所述，在遇到平板干裂缩水问题时，可通过增加平板培养基厚度、培养箱内增加挡板降低气流或避开风口、选择合适透气性的平皿、选择适宜琼脂的的培养基等进行综合的考虑分析，制定对应的方案和措施。

5.灭菌后的琼脂培养基，是否可以在恒温箱或者恒温水浴锅过夜或更长时间存放？对培养基性能会有影响吗？

  《GB4789.28 -2013培养基的试剂和质量要求》标准中指出，融化后的培养基放入47～50℃的恒温水浴锅中冷却保温(可根据实际培养基凝固温度适当提高水浴锅温度)，直至使用，培养基达到47℃～50℃的时间与培养基的品种、体积、数量有关。融化后的培养基应尽快使用，放置时间一般不应超过4 h。
  《中国药典2015版 9203药品微生物实验室质量管理指导原则》中指出融化的固体培养基应置于45～50℃的环境中，不得超过8小时。
  长时间的保温可能会造成培养基的营养成分流失，灵敏度下降，培养效果变差，琼脂的凝胶强度降低等情况，保温过夜或更长时间这种操作方法不是很规范。一般建议在满足试验安排的情况下，恒温存放的时间越短越好。

6.灭菌后的琼脂培养基若未用完，可以下次再重新融化继续使用吗？

  《GB4789.28 -2013培养基的试剂和质量要求》标准中指出，含有活性化学物质或不稳定性成分的固体培养基也应即配即用，不可二次融化；因此对于一些已添加抗生素、卵黄、血清等不稳定成分的培养基，不可以再次融化使用。而对于一般的培养基（未开封启用），可使用沸水浴或采用有相同效果的方法使培养基融化，再次融化后未用完的培养基则不能重新凝固留待下次使用。

原文链接：交流分享II药品微生物检验常见问题问答集锦（三）。