2020版药典《1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》学习笔记
【15版】......当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
【20版】......当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
【15版】......单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
【20版】......单向流洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
【15版】菌液制备：
取黑曲霉的新鲜培养物加入3~5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
【20版】菌液制备：
取黑曲霉的新鲜培养物加入3~5ml适量含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
【15版】微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配置的培养基均应进行培养基适用性检查。
【20版】微生物计数用的成品商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配置的培养基均应进行培养基适用性检查。
【15版】
...... 1.供试液制备......
【20版】
取消序号
（4）需用特殊方法制备供试液的供试品
【15版】气雾剂，喷雾剂供试品 取供试品，置-20℃或其他适宜温度冷冻约1小时，取出，迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至常温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。供试品亦可采用其他适宜的方法取出。用无菌注射器从每一容器中吸出药液于无菌容器中混合，然后取样检测。
【20版】气雾剂，喷雾剂供试品 取供试品，置-20℃或其他适宜温度冷冻约1小时，取出，迅速消毒供试品开启部位或阀门，正置容器，用无菌钢锥或针样设备在该部位与阀门结构相匹配的适宜位置钻一小孔，放至常温供试品各容器的钻孔大小和深度应尽量保持一致，拔出钢锥时应无明显抛射剂抛出，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。亦可采用专业设备释出抛射剂。释放抛射剂后再无菌开启容器，并将供试品转移至无菌容器中混合，必要时用冲洗液冲洗容器内壁。供试品亦可采用其他适宜的方法取出。用无菌注射器从每一容器中吸出药液于无菌容器中混合，然后取样检测。
【15版】 贴膏剂供试品 取供试品，去掉防粘层，将粘贴面朝上放置在无菌玻璃或塑料器皿上，在粘贴面上覆盖一层适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布），避免贴膏剂粘贴在一起。将处理后的贴膏剂放入盛有适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）稀释液的容器中，震荡至少30分钟。必要时，用同一稀释液将供试品进一步10倍系列稀释。
【20版】贴剂，贴膏剂供试品 取供试品，去掉防粘层，将粘贴面朝上放置在无菌玻璃或塑料器皿上，在粘贴面上覆盖一层适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布），避免贴膏剂供试品粘贴在一起。将处理后的贴膏剂供试品放入盛有适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）稀释液的容器中，震荡至少30分钟。必要时，用同一稀释液将供试品进一步10倍系列稀释。
【15版】
2.接种和稀释
按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。
【20版】
2.接种和稀释
按表1规定及下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。
【15版】
2.菌液对照组
【20版】
取消序号
【15版】
3.抗菌活性的去除或灭活
......若使用中和剂或灭活剂，实验中应设中和剂或灭活剂对照组，即取相应量稀释液替代供试品同实验组操作，以确认其有效性和对微生物无毒性。...
【20版】
3.抗菌活性的去除或灭活
......若使用中和剂或灭活剂，实验中应设中和剂或灭活剂对照组，即取相应量含中和剂或灭活剂的稀释液替代供试品同实验组操作，以确认其有效性和对微生物无毒性。......
【15版】涂布法 取15-20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基。
【20版】涂布法 取15-20ml适量（通常为15-20ml）温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基。
【15版】 薄膜过滤法 总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。
【20版】 薄膜过滤法 总冲洗量一般不超过500ml，最多不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。
【15版】 MPN法 接种管置30~35℃培养3天，逐日观察各管微生物生长情况。如果由于供试品的原因使得结果难以判断，可将该管培养物转种至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基，在相同条件下培养1~2天，观察是否有微生物生长。根据微生物生长的管数从表3查被测供试品每1g或每1ml中需氧菌总数的最可能数。
【20版】 MPN法 接种管置30~35℃培养不超过3天，逐日观察各管微生物生长情况。如果由于供试品的原因使得结果难以判断，可将该管培养物转种至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基，在相同条件下培养1~2天，观察是否有微生物生长。根据微生物生长的管数从表3查被测供试品每1g，1ml或10cm2每1ml中需氧菌总数的最可能数。
【15版】 表3 微生物最可能数检索表
每管含样品的g或ml数
MPN/g或ml
注：表内所列检验量如改用1g（或ml）、0.1g（或ml）、和0.01g（或ml）时，表内数字应相应降低10倍；改用0.01g（或ml）、0.001g（或ml）、和0.0001g（或ml）时，表内数字应相应增加10倍，其余类推。
【20版】 表3 微生物最可能数检索表
每管含样品的g，ml或ml10cm2数
MPN/g，ml或ml10cm2数
注：表内所列检验量如改用1g（或ml、10cm2）、0.1g（或ml、10cm2）、和0.01g（或ml、10cm2）时，表内数字应相应降低10倍；改用0.01g（或ml、10cm2）、0.001g（或ml、10cm2）、和0.0001g（或ml、10cm2）时，表内数字应相应增加10倍，其余类推。
【15版】 检验量 除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100cm2；贵重药品，微量包装药品的检验量可以酌减。检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂还不得少于4片。
【20版】 检验量 除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂、贴剂、贴膏剂为100cm2；贵重药品，微量包装药品的检验量可以酌减。检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂、贴剂、贴膏剂还不得少于4片。
贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。若供试品处方中每一剂量单位(如片剂、胶囊剂)活性物质含量小于或等于1mg,或每1g或每1ml(指制剂)活性物质含量低于1mg时,检验量应不少于10个剂量单位或10g或10ml供试品；若样品量有限或批产量极小(如:小于1000ml或1000g)的活性物质供试品,除另有规定外,其检验量最少为批产量的1%检验量更少时需要进行风险评估；若批产量少于200的供试品,检验量可减少至2个单位；批产量少于100的供试品,检验量可减少至1个单位。
【15版】 供试品检查3.MPN法
取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和供试品接种，所有试验管在30~35℃培养3~5天，如果需要确认是否有微生物生长，按方法适用性试验确定的方法进行。记录每一稀释级微生物生长的管数，从表3查每1g或1ml供试品中需氧菌总数的最可能数。
【20版】 供试品检查3.MPN法
取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和供试品接种，所有试验管在30~35℃培养3~5天，如果需要确认是否有微生物生长，按方法适用性试验确定的方法进行。记录每一稀释级微生物生长的管数，从表3查每1g或、1ml或10cm2供试品中需氧菌总数的最可能数。
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