研究进展 || 多株沙门氏菌在亚硫酸铋琼脂(BS)上的生长情况
沙门氏菌是世界上食源性腹泻最常见的病原菌之一。全球每年估计发生13亿因沙门氏菌导致的急性肠胃炎病例,其中300万患者死亡。我国沙门氏菌食物中毒多年来居细菌性食物中毒的首位,英国吉百利巧克力事件、美国的花生酱事件、匈牙利400多人甜食中毒事件等等,均是沙门氏菌污染所致,引起了各国重视,并将其列为出入境检验检疫的法定检查项目。
沙门氏菌在水中可生存2-3周,冰箱中可生存3-4个月,在自然环境的粪便中可存活1-2个月。沙门氏菌最适繁殖温度为37℃,在20℃以上即能大量繁殖,因此,低温储存食品是一项重要预防措施。
沙门检测之BS琼脂
该培养基中蛋白胨、牛肉膏为细菌生长提供所需的氮源、营养物质等;葡萄糖作为碳源;磷酸氢二钠为培养基缓冲剂;煌绿和亚硫酸钠可抑制大肠杆菌、变形杆菌和革兰氏阳性菌的生长,但对沙门氏菌的生长无影响;伤寒沙门氏菌和其他沙门氏菌可利用葡萄糖,将亚硫酸盐还原成硫化物并与硫酸亚铁反应使得菌落呈黑色,同时将铋离子还原成金属铋使菌落呈现金属光泽;琼脂为凝固剂。
培养基配制注意事项:本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性;宜于当天配置第二天使用,配置后平板为淡绿色不透明的凝胶状固体。
BS琼脂培养基质量要求
在GB4789.28-2013 培养基和试剂的质量要求中关于亚硫酸铋琼脂(BS)的质量控制标准为:
自本实验室中选取11株沙门氏菌在TSB肉汤中活化后接种于BS琼脂平板,36℃±1℃培养40h-48h观察不同沙门氏菌的菌落形态,是否均产生金属光泽。
具体沙门氏菌菌株如下:
置于36℃±1℃,培养40h时观察产生金属光泽的情况。
经观察,以上11株沙门氏菌培养后为黑色或灰绿色菌落,均产生明显的金属光泽,不同菌株的菌落形态略有差异,回收率均在87%以上。
具体沙门氏菌菌落形态参考下图:
本培养基要求抑制大肠埃希氏菌,避免对沙门氏菌的分离产生干扰;同时抑制革兰氏阳性菌-粪肠球菌,故自实验室中选取5株大肠埃希氏菌和7株粪肠球菌进行验证。
36℃培养40h后计数生长指数G值,结果如下:
经试验验证,5株大肠埃希氏菌和7株粪肠球菌均被抑制。
亚硫酸铋琼脂(BS)(产品号:12C04)平板上生长的多株沙门氏菌的菌落形态典型,可产生明显的金属光泽,易与其他杂菌区分。在进行沙门氏菌检测的过程中,同时需要与其他选择性分离平板(如XLD、HE或沙门氏菌显色培养基)上分离的典型和可疑菌落纯化后进行后续的生化与血清学鉴定,综合分析判断是否为沙门氏菌。
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