建立支原体培养基灵敏度检査（变色单位试验法）及供试品检查方法。除药典推荐培养基外，亦可使用可支持支原体生长的其他培养基，但灵敏度必须符合要求。

培养基与菌种对应关系如下表。

器具

（1）试管：螺口旋盖试管，利于培养时保持密闭；或者普通玻璃中试管，灭菌时使用硅胶塞，培养时换成橡胶塞；或者培养时使用无菌液体石蜡液封。

（2）新生牛血清。

（3）灭菌柜、生物安全柜、生化培养箱等。

培养基配制

（1）基础培养基：按标签所示配制方法制备，分装8mL/支，灭菌，待用。

（2）完全培养基：临用前每支8mL基础培养基中加入2mL新生牛血清。

注：半流体培养基在使用前应煮沸10〜15分钟，冷却至56°C左右，然后加入新生牛血清（培养基：血清为 8：2），并可酌情加入适量抑菌剂（青霉素等），充分摇匀。基础培养基，2-8℃可保存3个月。

菌液制备

将菌种接种于适宜的支原体培养基中，经36C±1℃密闭培养至培养基变色, 盲传两代。
  接种时建议做梯度稀释，选取刚变色的培养物进行下步试验。（培养时间太久，支原体容易死亡）

接种及培养

选取变色的新鲜培养物，接种至待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至 10^-7~10^-9，接种在支原体肉汤/半流体培养基内；口腔支原体稀释至10^-3~10^-5，接种在精氨酸支原体肉汤/半流体培养基内。每个稀释度接种3支试管，置36°C±1°C密闭培养7〜14天，观察培养基变色结果。

结果判定

以接种后培养基管数的 2/3 以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。
    灵敏度应达到：
    支原体肉汤/半流体培养基：肺炎支原体应达到10^-8；精氨酸支原体肉汤/半流体培养基：口腔支原体应达到 10^{- 4}。