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发布时间:2021-02-01

 

硫乙醇酸盐流体培养基(Fluid Thioglycollate Medium)是 Brewer 1940 年发明,自20 世纪50 年代起,国内外药典陆续将其收录,用于药品的无菌检查。1977 年版《中国药典》无菌检查项下,将硫乙醇酸盐流体培养基作为选择性培养基列入,并注明用于汞砷类化合物的无菌检查。1985 年版《中国药典》,硫乙醇酸盐流体培养基收载于无菌检查项下,培养基的名称为“需氧、厌气菌培养基”。在此后的各版《中国药典》及《中国生物制品规程》,均收载硫乙醇酸盐流体培养基用于无菌检查。

虽然硫乙醇酸盐流体培养基存在一定的局限性,其不能使所有的梭状芽孢杆菌生长,但之所以能够沿用至今,是因为其具有不可替代的巨大优势。即其能在普通有氧环境下提供厌氧条件,使需氧菌和厌氧菌均能够生长良好,并易于观察结果,这提供了一般实验室难以达到的厌氧培养条件。
 

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成分分析及原理
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我们先看一下硫乙醇酸盐流体培养基的配方:

(1)碳源和氮源

酪胨(胰酶水解))L-胱氨酸:是由酪蛋白经过胰酶水解后,将大分子的酪蛋白分解为䏡、胨、肽及多种氨基酸。由于原材料是从奶中提取的酪蛋白,质量稳定,氨基酸种类多,优于一般的胨,与L-胱氨酸构成细菌成长所需的氮源。

葡萄糖 : 提供微生物生长所需的碳源。自然界中大多数微生物都能利用葡萄糖,由于细菌代谢过程中分解代谢葡萄糖产酸,培养及加热灭菌时葡萄糖被破坏会产生有毒物质,因此应注意其用量及加热次数。

酵母浸出粉 : 酵母浸出粉是由氨基酸类、肽类、水溶性维生素及酵母多糖、酵母核酸组成的一种混合物。它不仅能补充氮源,还能提供微生物生长的各种维生素及氨基酸。

2)无机盐类

氯化钠及酪胨、酵母浸出粉中含有的等无机离子,构成细菌细胞的组织物质,具有影响酶活性及调节渗透压的作用。 

3)厌氧(还原)环境的形成与保持

硫乙醇酸钠或硫乙醇酸: 在培养基中的主要作用有两方面,一是L-胱氨酸、葡萄糖有降低氧化还原电位的作用,使深部氧化还原电位较低,因而维持培养基下层的厌氧条件,有利于厌氧菌的生长二是具有钝化砷和汞类药物及防腐剂的抑菌作用。当汞盐等物质存在时,它与培养基中的SH 基结合,抑制了细菌的生长。当培养基中有硫乙醇酸盐时,培养基内SH 基增多,消除汞盐等抑菌现象,有利于细菌的生长。

琼脂 : 在培养基中加入少量琼脂,可减少液面流动,降低氧的吸收,维持培养基底部的还原电位,有利于厌氧菌的生长。但应选用透明度好的琼脂,以免影响判断结果。

4)氧化还原指示剂

刃天青为氧化还原指示剂,新鲜制备的培养基,温度较高,培养基管的上部与氧接触,刃天青呈蓝色,而中下部培养基呈无氧状态,刃天青还原为无色,当培养基放置后,培养基与空气接触,有溶氧,刃天青被氧化,变为粉红色。

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使用应注意事项
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配制硫乙醇酸盐流体培养基时,除按照药典规定的方法制作外,还需要注意以下问题:

1硫乙醇酸盐流体培养基有0.075 %的琼脂,在灭菌后,培养基应呈现无浑浊状态,如果放置一段时间,出现轻微浑浊,尤其是放入冰箱后,浑浊现象更加明显。浑浊程度一方面可能与培养基用的琼脂质量有关,另一方面也可能与灭菌是否彻底有关,具体情况应具体分析。随着目前无菌检查对培养基的质量要求越来越高,包括北京三药在内的国内几家培养基供应商在这方面的研究有质的突破,不仅澄明度高,氧化层也能维持稳定。

2如果存在大体积配制,然后分装到小的容器中的情况,应注意分装的均一性。

3培养基在灭菌后至使用过程中取放应避免摇晃,以免培养基因振动而进入氧气,影响培养基的使用,接种操作应动作迅速、敏捷。

4在接种前,如果氧化层(粉红色)的高度超过培养基深度的1/3,须经100℃水浴加热至粉红色消失(不超过20 min),迅速冷却,只限加热一次,并防止被污染。

5硫乙醇酸盐流体培养基含有较多的还原性物质,在灭菌过程中,应注意在无菌保证的前提下,避免过热,以防止PH降低到6.9以下的可能。

6供试品加入到硫乙醇酸盐流体培养基中之后,可能出现琼脂析出的情况,这个应根据调查情况具体分析,并采取有效措施。
原文链接https://mp.weixin.qq.com/s/LXlRQcZnpuxu_CWLNSvjJg

 

 

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